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細胞簡介：

肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個器官，并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用。肝臟是尿素合成的主要器官，又是新陳代謝的重要器官。肝臟對來自體內(nèi)和體外的許多非營養(yǎng)性物質(zhì)如各種、毒物以及體內(nèi)某些代謝產(chǎn)物，具有生物轉(zhuǎn)化作用。通過新陳代謝將它們分解或以原形排出體外。在肝中及外圍有部分結(jié)締組織，這些結(jié)締組織是由成纖維細胞組成。

細胞特性：

1）細胞來源于人正常肝臟組織。

2)細胞鑒定：Vimentin熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)細胞生長方式：長梭狀，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 Delf原代成纖維細胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)檢測試劑盒 ，英文名： PⅠCP ELISA Kit

Mouse erythropoietin receptor (EPOR) ELISA Kit 小鼠紅細胞生成素受體(EPOR)檢測試劑盒

Mousehydroxyproline,HypELISAKit 小鼠羥脯(Hyp)檢測試劑盒 進口分裝

CLIAKitforHumanSolubleprotein-100B,S-100BELISAKit人S100B蛋白

通用型乙酰酯酶活性比色法定量檢測試劑盒50次

ELISAKitPGE1大鼠前列腺素E1

FKBP14重組人 FKBP14 蛋白 (His 標簽) Protein

streptomycin/OVA 鏈偶聯(lián)血藍蛋白 5mgstreptomycin/OVA 鏈偶聯(lián)血藍蛋白

IL13RA1重組人 IL13RA1 蛋白 (His 標簽) Protein

FGF16 Protein Human 重組人 / 食蟹猴 FGF16 / FGF-16 蛋白

HAVCR2 Protein Human 重組人 TIM-3 / HAVCR2 蛋白 (His & Fc 標簽)

streptomycin/OVA 鏈偶聯(lián)血藍蛋白 5mgstreptomycin/OVA 鏈偶聯(lián)血藍蛋白

FGF16 Protein Human 重組人 / 食蟹猴 FGF16 / FGF-16 蛋白

FKBP14重組人 FKBP14 蛋白 (His 標簽) Protein

HAVCR2 Protein Human 重組人 TIM-3 / HAVCR2 蛋白 (His & Fc 標簽)

IL13RA1重組人 IL13RA1 蛋白 (His 標簽) Protein

小鼠低氧誘導因子1α(HIF-1α)ELISA 試劑盒

Rat brain naiuretic peptide / brain naiuretic peptide (BNP) ELISA Kit 大鼠腦素/腦尿肽(BNP)檢測試劑盒

HumanpapillomavirusIgM,HPV-IgMELISAKit 人狀瘤病毒抗體IgM(HPV-IgM)檢測試劑盒 進口分裝

Humanasialoglycoproteieceptor,AGSPR檢測試劑盒人去唾液酸糖蛋白受體(AGSPR)檢測試劑盒

植物源性食品苦杏仁(apricotkernels)試劑盒20次

Humahymopein,TP-5ELISAKit人五肽(TP-5)檢測試劑盒

人肝成纖維細胞無內(nèi)毒素質(zhì)粒大量提取試劑盒   5T

Endo-freePlasmidMaxiKit   10T

無內(nèi)毒素質(zhì)粒小量提取試劑盒   50T

Endo-freePlasmidMiniKit   100T