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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

大鼠淋巴分離自組織；是機體的重要淋巴器官，其功能與免疫緊密相關(guān)，是T細胞分化、發(fā)育、成熟的場所。其還可以分泌激素及激素類物質(zhì)，具內(nèi)分泌機能的器官。位于胸腔前縱隔。胚胎后期及初生時，是一生中重量相對大的時期。隨年齡增長，繼續(xù)發(fā)育；此后逐漸退化，淋巴細胞減少，脂肪組織增多。的結(jié)構(gòu)表面有結(jié)締組織被膜，結(jié)締組織伸入實質(zhì)把分成許多不分隔的小葉。小葉周邊為皮質(zhì)，深部為髓質(zhì)。皮質(zhì)不包圍髓質(zhì)，相鄰小葉髓質(zhì)彼此銜接。皮質(zhì)主要由淋巴細胞和上皮性網(wǎng)狀細胞構(gòu)成，胞質(zhì)中有顆粒及泡狀結(jié)構(gòu)。網(wǎng)狀細胞間有密集的淋巴細胞。的淋巴細胞又稱為細胞，在皮質(zhì)淺層細胞較大，為較原始的淋巴細胞。中層為中等大小的淋巴細胞，深層為小淋巴細胞。從淺層到深層為造血干細胞增殖分化為小淋巴細胞的過程。皮質(zhì)內(nèi)還有巨噬細胞，無淋巴小結(jié)。髓質(zhì)中淋巴細胞少而稀疏，上皮性網(wǎng)狀細胞多而顯著。形態(tài)多樣，胞質(zhì)中有顆粒及泡狀結(jié)構(gòu)，為其分泌物，尚有散在的圓形的小體。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠淋巴采用機械研磨法結(jié)合密度梯度離心法制備而來，細胞總量約為1×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的大鼠淋巴經(jīng)過檢測，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 懸浮

細胞形態(tài) 圓形

傳代特性 不增殖；不傳代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠線粒體乙脫氫酶(ALDM)檢測試劑盒 ，英文名： ALDM ELISA Kit

Pla vitamin D (VD) ELISA Kit 植物(VD)檢測試劑盒

MouseEndostatin,ESELISAKit 小鼠內(nèi)皮抑素(ES)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanAmylinELISAKit人胰淀素

細胞HCV(HEPATITISVIRUSC)病毒定量PCR擴增檢測試劑盒20次

ELISAKitER大鼠雌二醇受體

IL1R1重組小鼠 IL1R1 / CD121a 蛋白 (Fc 標簽) Protein

酸激酶(PK)重組蛋白 Recombinant Pyruvate Kinase, Liver And RBC (PK)

GCSH重組人 GCSH 蛋白 Protein

CD59 Protein Human 重組人 CD59 蛋白

CD200 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD200 蛋白

酸激酶(PK)重組蛋白 Recombinant Pyruvate Kinase, Liver And RBC (PK)

CD59 Protein Human 重組人 CD59 蛋白

IL1R1重組小鼠 IL1R1 / CD121a 蛋白 (Fc 標簽) Protein

CD200 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD200 蛋白

GCSH重組人 GCSH 蛋白 Protein

小鼠血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human granulocyte macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) ELISA Kit 人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)檢測試劑盒

Humankeratansulfate,KSELISAKit 人硫酸角質(zhì)素(KS)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Camelansforminggrowthfactorsβ2,TGFβ2檢測試劑盒轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

玉米葉片原生質(zhì)細胞分離試劑盒5次

Mouseinducibleniicoxidesyhase,iNOSELISAKit小鼠誘導(dǎo)型合成酶(iNOS)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠胸腺淋巴細胞小鼠血小板反應(yīng)蛋白檢測試劑盒   小鼠血小板反應(yīng)蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠血小板反應(yīng)蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠血小板反應(yīng)蛋白試劑盒、小鼠血小板反應(yīng)蛋白檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠血紅素氧合酶檢測試劑盒   小鼠血紅素氧合酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠血紅素氧合酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠血紅素氧合酶試劑盒、小鼠血紅素氧合酶檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠血管性血友病因子檢測試劑盒   小鼠血管性血友病因子試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠血管性血友病因子試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠血管性血友病因子試劑盒、小鼠血管性血友病因子檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠胰島素原檢測試劑盒   小鼠胰島素原試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠胰島素原試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠胰島素原試劑盒、小鼠胰島素原檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。