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細胞簡介：

人大隱靜脈平滑肌分離自大隱靜脈；大隱靜脈起于足背靜脈弓內側端，經(jīng)內踝前方，沿小腿內側緣伴隱神經(jīng)上行，經(jīng)股骨內側髁后方，進入大腿內側部，與股內側皮神經(jīng)伴行，逐漸向前上，在恥骨結節(jié)外下方穿隱靜脈裂孔，匯入股靜脈，其匯入點稱為隱股點。有5條屬支：旋髂淺靜脈、腹壁淺靜脈、外靜脈、股內側淺靜脈和股外側淺靜脈，它們匯入大隱靜脈的形式多樣，相互間吻合豐富。大隱靜脈曲張行高位結扎時，須分別結扎、切斷各屬支，以防復發(fā)。大隱靜脈平滑肌細胞主要功能：①血管平滑肌細胞的生長潛力是原發(fā)血管病發(fā)的重要異常因素；②參與血管壁的炎癥反應，并與血管疾病的進展和穩(wěn)定有關。因此，研究大隱靜脈平滑肌細胞的代謝和信號通路是研究大隱靜脈擴張等疾病的良好實驗材料。大隱靜脈平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數(shù)細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。

方法簡介：

公司實驗室分離的人大隱靜脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的人大隱靜脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠三腺原酸(T3)檢測試劑盒

People in morphine peptide -2 (EM-2) ELISA Kit 人內嗎非肽-2(EM-2)檢測試劑盒

Humanβamyloidprecursorprotein,βAPPELISAKit 人淀粉樣前體蛋白(βAPP)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

GuineaPigadvancedglycationendproducts,AGEs檢測試劑盒豚鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母0脂酶D1(PhospholipaseD1)活性熒光定量檢測試劑盒20次

Mousec-junELISAKit小鼠c-jun檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

CD6重組小鼠 CD6 / TP120 蛋白 Protein

轉鐵蛋白受體(TFR)天然蛋白 Native Transferrin Receptor (TFR)

CCL1重組人 I-309 / CCL1 / TCA-3 蛋白 Protein

CDK16 Protein Human 重組人 CDK16 / PCTAIRE1 / PCTK1 蛋白 (GST 標簽)

PRLR Protein Rat 重組大鼠 PRLR / Prolactin receptor 蛋白

RNA結合基元蛋白20(RBM20)重組蛋白 Recombinant RNA Binding Motif Protein 20 (RBM20)

CDK16 Protein Human 重組人 CDK16 / PCTAIRE1 / PCTK1 蛋白 (GST 標簽)

PLK1重組小鼠 PLK1 / PLK-1 蛋白 Protein

IL12A Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 / 恒河猴 IL12A / NKSF1 蛋白 (Fc 標簽)

IZUMO1重組人 IZUMO1 蛋白 Protein

小鼠胃泌素(Gas)檢測試劑盒 96T/48T

Human phosphatidylinositol aibody IgG/IgM (PI Ab-IgG/IgM) ELISA Kit 人0脂酰肌醇抗體IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)檢測試劑盒

HumanElastaseELISAKit 人彈性蛋白酶(Elastase)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

ChickenIerleukin18,IL-18檢測試劑盒雞白介素18(IL-18)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細胞GSK-3ALPHA蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

MouseGlycogenphosphorylaseBB,GP-BBELISAKit小鼠糖原0酸化酶同工酶BB(GP-BB)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

人大隱靜脈平滑肌細胞小鼠纖溶酶原激活劑抑制物-1(mouse PAI-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

小鼠血小板生長因子(mouse PDGF)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

小鼠血小板源生長因子-BB(mouse PDGF-BB)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

小鼠血小板生長因子受體α(mouse PDGF sRα)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。